静态光散射
用静态光散射测量粒子特性,如蛋白质聚集状态和空衣壳/完整衣壳比
通过光来解决一切问题
静态光散射 (SLS) 的测量方法看似简单——一束激光照射溶液样品,击中粒子,然后反射回来——但它却是检测溶液中颗粒的优选技术之一。在静态光散射测量中,反射光的强度是相对重要的测量数据,例如,如果您知道样品中包含哪些类型的颗粒,那么您可以根据反射光的强度了解颗粒的各种信息。静态光散射还可以用来测量病毒颗粒的滴度,或者监测样品中的颗粒何时会开始出现聚集。
静态光散射能够通过光的力量完成这一切。
静态光散射的工作原理
在进行静态光散射测量时,激光会直射样品,然后会在样品周围的一个或多个角度测量散射光的强度。散射光的强度会受到许多样品特性和实验设置的影响,例如:
- 颗粒分子量
- 颗粒粒径 (Rg)
- 颗粒浓度
- 颗粒间的相互作用力
- 颗粒和溶剂的折射率
- 激光与探测器之间的角度
- 激光波长
我们可以用被测量的散射光强度来了解样品中的颗粒信息。以下是具体的工作原理:
瑞利散射
比光的波长小的颗粒将向各个方向均匀地散射光 (瑞利散射)。对于紫外和可见光激光而言,像蛋白质和腺相关病毒 (AAV) 这样的生物分子认为是小颗粒,它们会向各个方向均匀地散射光。
测量光强
散射光的强度受到与样品、光源和检测设置相关的许多因素的影响。对于浓度低的小颗粒,散射光的强度正比于:
- 颗粒分子量 (M)
- 颗粒浓度 (C)
- 缓冲液的折射率 (no)
- 颗粒折射率与浓度的微分之比 (dn/dc)2
升高温度
通过静态光散射和升温检测,您将可以获得聚集温度 (Tagg),聚集温度指的是静态光散射强度开始增强,聚集开始发生时的温度。
搭配使用两种技术
同时使用静态光散射和动态光散射检测,您可以获得腺相关病毒载体衣壳的散射光强度,这是获得简单快速AAV滴度测定的第一步。
静态光散射和动态光散射之间有什么区别?
许多仪器通常可以同时提供静态光散射和动态光散射 (DLS)数据,静态光散射和动态光散射之间有什么差异以及如何才能根据情况选择出合适的技术呢?
静态光散射主要测量的是平均散射光强度,在某些特定的实验设置下可以告诉我们关于颗粒的分子量和浓度信息。而动态光散射主要测定的是散射光强度随时间变化的速度,从而提供有关扩散速率和颗粒大小的信息。就像您在听一场摇滚音乐会一样,静态光散射会告诉您音乐的音量有多大,动态光散射会告诉您正在播放的是哪首歌。
因此,静态光散射适用于检测聚集开始发生时,因为它是一种直接测量散射光强度的技术,当颗粒的分子量增加,散射光强度也会相应增加,通过观察静态光散射信号的变化,您将可以准确地了解颗粒会何时发生聚集。相比之下,动态光散射是根据颗粒在溶液中的扩散行为来判断颗粒的粒径,因此动态光散射需要花费一些时间来检测四处移动的颗粒。然而,动态光散射也有相应的优势,当您对样品了解比较少时,动态光散射仍可以提供非常精确的测量结果,所以它非常适用日常或批次间的粒径比较,以及测量长时间等温实验中颗粒粒径的变化。
Uncle
Uncle结合了3种不同的测定方法——差示扫描荧光 (DSF)、静态光散射和动态光散射,并且可以定制全光谱荧光检测分析,从而迅速获取有关蛋白质的稳定性、展开和聚集的所有信息。
Stunner
Stunner是一款仅需2 μL样品,即可整合紫外/可见光谱、旋转角度动态光散射 (RADLS) 以及多角度光散射 (MALS) 数据的系统。通过一次性检测颗粒浓度、粒径、质量、聚集体检测和总RNA,来确定您的脂质纳米颗粒的质量。 同时,进行蛋白质浓度、粒径、分子量和聚集体检测。深入研究您的腺相关病毒 (AAV) 或腺病毒 (AdV),获得总的衣壳滴度和空/实心率。一步到位,即可获得脂质纳米颗粒 (LNP)、蛋白质或病毒载体的质量。
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