脂质纳米颗粒的纯化与浓缩

面临的挑战

脂质纳米颗粒 (LNP) 制成后,通常需要快速去除乙醇等有机溶剂,以保持药物封装的有效性和脂质纳米颗粒结构的完整性。常用的透析法耗时较长,并且需要进行二次浓缩来减少样品的体积,所以它并不是一个优质的解决方法。

解决方案

作为一款台式缓冲液置换平台,Unagi可以在不影响脂质纳米颗粒的完整性的情况下,整合了纯化、浓缩和置换等全部的繁琐流程。Unagi通过使用超滤/渗滤 (UF/DF) 技术,以0.5-8 mL的起始体积来置换1-8份样品。在运行过程中,Unagi会通过超声波传感器追踪样品体积,对样品进行过滤,并能确定所要添加到每份样品中的准确体积。Unagi可以不断循环这个过程,直至每份样品的置换百分比或脂质纳米颗粒浓度达到目标值为止。

The secret sauce

Unagi使用一种叫做Una的耗材,每个Una可以装入0.5-8 mL样品。Una配有10、30和100 kDa截留分子量的再生纤维素膜,再生纤维素膜可以确保样品保持原状,防止样品被吸附,样品液体可以直接穿过再生纤维素膜,从而让回收率≥96%。

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Big Tuna是一款全自动缓冲液置换系统,它通过改良的超滤/渗滤 (UF/DF) 技术来快速纯化、浓缩和置换脂质纳米颗粒,从而更快地处理样品。在运行过程中,Big Tuna可以实时监测样品体积,补充过滤后体积,从而让您的样品的置换百分比和脂质纳米颗粒浓度达到目标值。用于制备脂质纳米颗粒的有机溶剂的流速会比较快,而Big Tuna能做出适当的调整,避免孔板变干。

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Big Tuna使用了一种叫做Unfilter的孔板耗材。所有的Unfilter都配有再生纤维素膜,再生纤维素膜可以尽可能地减少非特异性结合。Unfilter有2种规格:24孔的Unfilter (每孔0.45-8 mL) 和96孔的Unfilter (每孔100-450 µL)。Unfilter 96提供3、10、30和100 kDa的分子量截留。Unfilter 24提供10、30和100 kDa的分子量截留 ,它的100 kDa的Unfilter是处理大容量LNP样品的好帮手。

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实验论证

您可以通过优化Unagi的缓冲液置换和浓缩参数来获得样品的高回收率,并尽可能减少对样品完整性的影响。在准备脂质纳米颗粒 (LNP) 样品时,您无需为了节省手动操作时间而牺牲样品的质量,比如颗粒大小的变化或封装效率的降低。

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Big Tuna 在纳米颗粒的浓缩和纯化方面具有非常显著的优势,同时还可以保持有效载荷封装的有效性。只需不到30分钟的时间,即可完纳米颗粒浓缩和纯化设置,然后Big Tuna会在90分钟内完成浓缩和清理操作。

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缓冲液置换和样品浓缩可以说是令人头疼的两件事。因为它们需要花费大量的时间和人力。而Unagi作为一款无需手动操作的台式缓冲液置换平台,它可以轻松地帮您解决这两件繁琐的事情。

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Big Tuna

Big Tuna可自动处理缓冲液置换以及蛋白质或基因治疗载体 (如腺相关病毒载体、脂质纳米颗粒和病毒样颗粒) 的配制、浓缩和清理等操作,让您只需花费不到30分钟的设置时间,即可跳过漫长的手动操作过程,腾出更多的时间来处理其他重要工作!缓冲液置换以及纳米颗粒浓缩是您在处理样品前不得不要做的事,但是通常这会十分耗时以及需要手动操作。Big Tuna可自动处理这一交换过程,用于配方、浓缩和纯化蛋白质或基因治疗载体,例如腺相关病毒 (AAV)、脂质纳米颗粒 (LNP) 和病毒样颗粒 (VLPs),仅需30分钟的准备时间,即可跳过漫长的手动操作过程。

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