差示扫描荧光法
快速检测蛋白质的稳定性,以便进行构象和配方的筛选
加快蛋白稳定性研究
差示扫描荧光法 (DSF) 可以通过评估随温度升高时蛋白质构象的变化,快速为您筛选出理想的蛋白质和配方选择。
充分利用荧光
差示扫描荧光的发工作原理是:当蛋白质构象发生变化时,通过监测荧光的变化来评估蛋白质的稳定性。荧光既可以来自蛋白质自身的色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸残基 (内源荧光),也可以来自添加的荧光团,如SYPRO® Orange染料。
监测变化
蛋白质的荧光光谱形态通常受到芳香族氨基酸周围的微环境影响。在未变性的蛋白中,芳香族氨基酸通常处于高度非极性的疏水区域;而在变性的蛋白中,芳香族氨基酸暴露于极性环境而产生荧光光谱的变化,因此导致两者的荧光光谱并不相同。
观察荧光信号的变化
当温度开始升高时,差示扫描荧光法会通过监测荧光信号的变化,来评估蛋白质的稳定性。
识别温度拐点
起始变性温度 (The onset temperature, Tonset) 是蛋白质开始变性时的温度。其他温度拐点 (Tm1, Tm2) 是对应的蛋白质结构域去折叠达到一半时的温度。如果蛋白质展开的过程中发生了聚集,那么您可以通过静态光散射技术测定的聚集温度 (Tagg) 来评估。
充分利用全光谱荧光检测
采集蛋白的全荧光光谱,不仅可以提供更佳的数据信噪比,而且还可以帮助您分析实验出现异常时的原因和后续方案。例如有些蛋白质可能没有芳香族氨基酸,缓冲液有荧光背景干扰,或蛋白发生了荧光内滤效应——所有这些都能通过蛋白全荧光光谱反映出来。
差示扫描荧光法,还可以借助外源荧光来解析蛋白质的变性过程。这是在蛋白质没有芳香族氨基酸时的一种替代性方案。同时,这种方法还可以用来描绘病毒载体的稳定性。如果您使用了对核酸特异性识别的染料,就可以检测病毒会在什么条件下会释放出它的基因组。
想要了解更多信息?
如果您还有任何问题或者想要了解更多信息,请与我们联系。