基于染料的荧光定量法
快速定量核酸并测量包封率
荧光定量法的优势
基于染料荧光团的可选择性广和敏感性高，检测荧光是一种强大的定量技术。特异性结合核酸的荧光团是定量DNA或RNA的好方法，即使在存在其他生物分子的情况下也是如此。荧光也比其他技术具备更高的灵敏度，可以可靠地定量低于1 ng/µL核酸的样品。利用染料-配体相互作用的检测原理是许多高选择性和高灵敏度分析方法的基础。
荧光定量法的原理
当荧光团被特定波段的光激发时，它会吸收光子能量，使其外层电子进入激发态。这种激发态的稳定性很低，因此这些电子希望尽快恢复到更稳定的基态。在这个过程中，激发的荧光团需要释放一些能量，因此它会以一个高于激发光波长并具有较低能量的形式发出荧光。有荧光定量法功能的仪器，具有激发荧光团的光源、发射滤光片和位于后面的检测器，而发射滤光片只允许特定波长范围内的发射光透过。收集的发射光的量与存在的荧光团的量是成正比，因此荧光是一种可确定浓度的定量方法。
选择实验合适的荧光染料
为了使分子具有荧光特性，其结构中的电子需要一定的空间。这是通过共轭π键实现的，通常在类似苯环等环结构中，这允许π电子在共轭结构内的原子之间自由移动。分子的形状会影响其特定的荧光特性，包括产生的最大激发波长和发射光的最高强度 (λmax)。荧光团的激发和发射波长并不是单一的波长，而是具有一定的光谱范围。为了优化信号收集和检测，最好选择最大激发波段接近激发光源的染料。并使发射滤光片覆盖荧光团的最大发生波段来获得最佳灵敏度。
制定标准曲线
检测分析的最后一步，就是将检测的相对荧光强度转换为样本实际浓度。所有荧光定量检测都应包括一条标准曲线，该曲线是将荧光强度值与已知浓度的分析物建立换算关系。检查标准曲线的拟合形态以确保所有测量值都能进行有效的分析。
照亮您的LNP定量
在测量LNP的包封率 (EE%) 时，检测的荧光信号是足够强的，有很好的信噪比。测量EE%的分析依赖于检测荧光染料 (如RiboGreen®) 与溶液中的游离RNA结合时可见荧光的增加。封装在LNP里的RNA不会和RiboGreen®的结合。将游离RNA的浓度与总RNA的UV/Vis检测浓度一起，即可运算得到EE%值。
Stunner
Stunner是一款仅需2 μL样品即可同时检测UV/Vis浓度和旋转角动态光散射 (RADLS) 的系统。Stunner AF在此技基础上增加了基于染料的荧光检测模块，在同一次运行中可以看到更多的信息。通过一次点击，获取粒径、包封率 (EE%)、颗粒浓度和聚集体检测等所有信息，从而确定脂质纳米颗粒的质量。通过全面的分析数据，你就会知道你的纳米颗粒是否可以使用。
想要了解更多信息？
纳米颗粒研究人员现在可以使用合适的工具进行LNP表征研究，该工具结合了UV/Vis、旋转动态光散射 (RADLS) 和基于染料的荧光。如果您仍还有任何问题或者想要了解更多信息，请与我们联系。