慢病毒的滴度与结构分析

面临的挑战

慢病毒样品的成分通常非常复杂，很难对其进行分析。所以，要想从原料液获取到整个净化过程中，对各批次慢病毒样品批次的质量进行快速有效的监控并不是一件容易的事情。再加上，监管机构对基于慢病毒的疗法的分析开发和产品特性的要求越来越严。所以，准确了解慢病毒各批次样品所含的物质已经变得尤为重要。

目前，许多慢病毒分析方法在未纯化病毒的完全测定方面受到了一些限制，无法准确检测慢病毒滴度、查看RNA是否存在，以及监测早期样品中的聚集情况。p24酶联免疫吸附测定法 (p24 ELISA) 是测定慢病毒的物理滴度最常用的方法，而定量聚合酶链反应可以检测出慢病毒的基因组滴度。但这两种技术方法都只关注病毒的一个结构部分——衣壳或RNA，无法提供更详细的病毒结构信息。除此之外，它们也无法处理含有高浓度细胞污染物和游离p24衣壳蛋白的未纯化样品。因此，这两种技术方法虽然可以让您对p24衣壳蛋白和RNA的数量有个大致的了解，但无法让您知道它们是否形成了病毒。

作为酶联免疫吸附测定法的一种替代方案，基于非特异性颗粒分析的技术方法也可以测定出慢病毒的物理滴度。这些技术方法虽然可以检测和计算慢病毒的数量，但没有对慢病毒的内部和表面进行直接检测，无法得出慢病毒的内部成分。

解决方案

无论是哪一种假型慢病毒，Leprechaun都可以在药物生产的每一个阶段中，提供单个慢病毒颗粒的完整生物物理表征信息，无需进行任何纯化操作。同时，即使病毒浓度低至1x10⁷ 颗粒/mL，Leprechaun也能测定出病毒的滴度和大小，检测每个病毒颗粒是否拥有衣壳和RNA。

实验论证

了解病毒全貌

Leprechaun的Luni表面可以借助包膜蛋白捕获慢病毒，确保您的慢病毒滴度数据没有被原始样品中的“垃圾”所污染。Leprechaun可以使用干涉测量法对捕获的粒子进行逐一测量，可检测的大小范围为35-200 nm。Leprechaun还可以通过荧光显微镜，帮您精确找出那些拥有合适的大小、正确包膜蛋白和p24衣壳蛋白以及含有RNA的慢病毒。受损的病毒颗粒、错误的组装和病毒聚集都会破坏病毒结构的完整性，进而导致检测结果的不准确——不过您放心， Leprechaun随时都可以为您解决这些问题。