腺相关病毒载体的浓缩与缓冲液置换

面临的挑战

在科学界,人们通常需要对制备的较低滴度的腺相关病毒进行纯化和浓缩。但使用离心过滤装置或流动过滤设备进行相关操作,通常需要耗费大量的人力——特别是在样品数量较多和样品体积较大的情况下。此外,腺相关病毒载体,腺相关病毒载体需要进行快速地纯化及缓冲液置换,该过程不能损坏腺相关病毒载体的完整性,并且还要具有高回收率。

解决方案

作为一款台式缓冲液置换平台,Unagi将纯化以及浓缩AAV样品所涉及到的,通常十分痛苦并需要手动处理的那些步骤整合在一起,并实现了自动化。Unagi使用超滤/渗滤 (UF/DF) 技术,可同时处理8份体积在0.5-8 mL之间的样品。Unagi在工作过程中会仔细跟踪样品体积、当样品被过滤后,可以确定需要向每份样品回添的体积。Unagi可以一直重复这个过程,直到每份样品的置换百分比或腺相关病毒载体浓度达到目标值为止。

Take it down

Unagi每次可处理1-8份样品,同时,Unagi使用一种叫做Una的耗材,每个Una可以装入0.5-8 mL的样品。Una配有10、30和100 kDa截留分子量的再生纤维素膜,再生纤维素膜可以确保样品保持原状,防止样品被吸附,样品液体可以直接穿过再生纤维素膜,从而让回收率≥96%。

Served up a'la carte

Big Tuna是一款全自动缓冲液置换系统,它提供了一种更统一的样品处理方法,可以精确地对样品参数进行控制,这是手工方法所无法做到的。Big Tuna通过经过改进的超滤/渗滤 (UF/DF) 来置换和浓缩腺相关病毒载体和其他病毒载体。Big Tuna在运行过程中可以实时监测样品体积,将被过滤的液体体积给补充回去,让样品的置换百分比或腺相关病毒载体浓度达到目标值。

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Big Tuna使用了一种叫做Unfilter的孔板耗材。所有的Unfilter都配有再生纤维素膜,再生纤维素膜非常适用于浓缩病毒载体,因为它可以最大限度地减少非特异性结合。Unfilter有2种规格:24孔的Unfilter 24 (0.45-8 mL) 和96孔的Unfilter 96 (100-450 µL)。Unfilter 96的截留分子量有3、10、30和100 kDa;而Unfilter 24的截留分子量有10、30和100 kDa,并可以将48 mL的样品浓缩为8 mL。一般来说,较大的截留分子量适用于浓缩粒径较大的病毒载体。

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实验论证

评估腺相关病毒载体的衣壳稳定性

腺相关病毒载体的衣壳稳定性会受到缓冲液pH、盐和离子强度的变化的影响。如果将UncleUnagiBig Tuna一起搭配使用,那么您就可以在不使用大量样品的情况下对这些影响因素进行研究。Unagi和Big Tuna都可以在不破坏衣壳的情况下,对腺相关病毒载体进行温和的换液,然后Uncle就可以用来评估在这些不同的影响因素下,腺相关病毒载体的衣壳稳定性以及核酸开始释放的温度。

Get your AAV to its happy place_R2

Unagi

在处理样品之前,缓冲液置换和浓缩可以说是令人烦恼的两件事。因为它们需要花费大量的时间和人力。而Unagi作为一款无需手动操作的台式缓冲液置换平台,它可以轻松地帮您处理这两件繁琐的事情。

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Big Tuna

缓冲液置换以及样品浓缩是您在处理样品前不得不要做的事,但是通常这会十分耗时以及需要手动操作。作为一款全自动缓冲液置换系统,Big Tuna通过改良的超滤/渗滤技术以及柔和的混合技术来对蛋白质、核酸或基因治疗载体 (如腺相关病毒载体和脂质纳米颗粒) 进行缓冲液置换、浓缩和纯化,为您节省出大量的时间去处理其他更重要的事情。

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