蛋白稳定性与配方筛选
面临的挑战
如果蛋白质不稳定,那么它就容易发生变性和聚集,导致科研工作的进程受阻,而稳定的蛋白质会推动科研工作的进行。因此,为了获得稳定的蛋白质,科学家们开发出了许多测量蛋白稳定性的方法。
要确定蛋白质的稳定性,就必须要对蛋白质的变性和聚集进行测量。但大多数测量方法需要花费大量的样品和时间,并且往往只能提供部分信息。
解决方案
Aunty是具有定制应用程序的蛋白稳定性分析平台,可一次快速研究多达96个样品的蛋白质稳定性,每个样品仅需8µL。荧光、静态光散射 (SLS) 和动态光散射 (DLS) 模式都可以同时读取相同的样品,从而对热稳定性、胶体稳定性、长期稳定性和病毒载体稳定性有深入的了解。
当荧光捕获到解折叠时,SLS会在蛋白质分子量发生即时变化时发现聚集。DLS密切关注聚集体的流体动力学尺寸。筛选更多的候选制剂、配方或条件,以快速找出哪种最稳定。
实验论证
Aunty是如何发现蛋白稳定性的问题的
在Aunty的DSF实验中,样品在板的孔中加热。当蛋白质发生解折叠时,荧光会增强,并显示熔化温度 (Tm)。SLS以聚集温度 (Tagg) 显示聚集何时开始,这可以与Tm1、Tm2同步,也可以独立于任何Tm发生。因为SLS强度与分子量有关,所以它对聚集非常敏感,是准确观察聚集何时开始的首选方法。在热梯度期间监测DLS,了解这些聚集体在形成时有多大,以及它们最终生长到什么程度。
比较各种影响因素
您可以通过Aunty比较不同的蛋白质、配方以及其他可以影响稳定性的因素。一个简单的氨基酸突变或缓冲液的改变就可以改变蛋白质的热变性中点温度或者展开行为,让原本只有两个热变性中点温度的蛋白质具有三个热变性中点温度。类似的,糖、盐、表面活性剂、pH值变化或其他蛋白质危害(如冷冻-解冻循环)也会对蛋白质的热变性中点温度或者展开行为产生影响。
扫清障碍
Aunty通过结合动态光散射、差示扫描荧光 (DSF) 和静态光散射三种检测技术方法,以及控制温度的变化,让您可以在测定蛋白质稳定性的过程中,不会遇见任何障碍。在收集展开和聚集方面的数据之后,您就可以对蛋白质的等温稳定性、自相互作用、复性等有着更加深入的了解。Aunty搭载了专门设计的应用程序,因此,您只需用少量的蛋白样品中即可获取大量的信息。
Aunty
Aunty整合了荧光、静态光散射和动态光散射三种检测技术,可以通过一次实验提供多达96种样品的蛋白质解折叠和聚集问题的结果,所有这些都是从同一个样品中记录的。在全光谱荧光检测中添加可定制的分析,您就有了一个灵活的工具,可以以极快的速度和精准的数据质量展示任何蛋白质稳定性结果。观察蛋白质何时解折叠和聚集的整个过程,可以准确地揭示蛋白质样品的情况。
想要了解更多信息?
如果您想要了解更多关于Uncle如何快速测定蛋白质稳定性的信息,请与我们联系。