紫外/可见吸收光谱
用紫外/可见吸收光谱来检测蛋白质和DNA
微量样品、高精度的紫外/可见吸收光谱技术
蛋白质、DNA和RNA在溶液中能吸收紫外波段的光，这意味着您可以使用紫外/可见吸收光谱法来检测它们的浓度 (图1)。用紫外/可见吸收光谱进行定量检测被称为紫外/可见吸收光谱定量检测法，紫外/可见吸收光谱定量检测法运用了比尔定律 (Beer's law)，比尔定律有时也被称为“比尔-朗伯定律” (Beer-Lambert law)。
Figure 1. Protein dilution spectra and DNA dilution spectra.
紫外/可见吸收光谱的工作原理
蛋白质、DNA或RNA样品的吸光度与浓度成正比。蛋白质在280 nm处吸收的光最多，而DNA和RNA在260 nm处达到峰值。根据比尔定律，已知280 nm或260 nm（称为A280或A260）处的吸光度、已知光通过溶液的光程长度和样品的消光系数或浓度因子，就可以计算出样品的浓度。紫外/可见分光光度计能够自动进行这些测量和计算，无需任何额外的试剂。优秀的分光光度计可以在低样品体积下进行高通量的测量。
Lunatic和Stunner分光光度计使用了固定光程的微量比色皿 (图2)，仅需2 μL样品就可以在230-750 nm和0.03-275 的吸光度范围内进行高速的紫外/可见吸收光谱分析。微量比色皿是微流控环路的一部分，可以防止样品间的交叉污染或蒸发的发生，同时提供高精度的吸收光谱数据。固定的光程长度，能使Lunatic和Stunner的准确度达到2%以内，精确度在1%以内。有关紫外/可见吸收光谱和Lunatic创新技术的更多信息，请查看此技术说明。
Lunatic和Stunner的检测板是符合SBS标准的96孔平板。平板上每个样品孔都对应有两个微量比色皿，光程分别为0.1mm和0.7mm。0.1 mm的微量比色皿可以检测到较高的吸光度，而0.7mm的微量比色皿可以检测到较低的吸光度。因此，这两种不同尺寸的微量比色皿可以让您无需稀释，即可同时检测不同浓度的样品。且在10分钟内即可完成96个样品的检测。Lunatic和Stunner的质量评估已经通过了美国国家标准与技术研究院 (National Institute of Standards and Technology, NIST) 的参考材料 (Reference Materials, RMs) 的验证。美国国家标准与技术研究院有3种用于测试紫外/可见分光光度计的参考材料：单克隆抗体 (NISTmAb)、色氨酸和尿嘧啶，Lunatic和Stunner对这些材料的测量结果都达到了原标定浓度值。在检测这些样品时，Lunatic和Stunner都可以保证每次的测量值都与标准值的偏离程度不超过2% (图3)，符合美国药典 (United States Pharmacopoeia, USP) 和欧洲药典 (European Pharmacopoeia, Ph. Eur.) 的指导原则。
紫外/可见吸收光谱法是众所周知的直接定量蛋白质、DNA和RNA的方法之一。Unchained Labs通过新型的光学技术、优质的耗材和分析技术，将紫外/可见吸收光谱定量分析推到了一个新的高度。
Figure 2. High Lunatic plate circuit.
Figure 3. Lunatic and Stunner accuracy of NIST RMs.
Unchained Labs的所有紫外/可见分光光度计器都可以：
- 在230-750 nm的范围内获取精确的全光谱紫外/可见吸光度结果；
- 使用2 µL样品体积获取检测结果；
- 快速读取数据；
- 在0.03-275 OD的光密度范围内进行测定；
- 在0.02–200 mg/mL的范围内对IgG进行定量分析；
- 在1.5-13,750 ng/µL的范围内对核酸进行定量分析；
- 使用微流控环路防止样品的蒸发和交叉污染；
- 采用固定光程微量比色皿，检测细微的变化，获得准确的测量结果；
- 拥有用于纯化或非纯化样品定量的专用应用程序；
- 维护成本低，且无需任何清理。
查看我们以下两款紫外/可见风光光度计，它们可以解决有关蛋白质和DNA定量的所有问题。
Lunatic
Lunatic使生物制品、DNA和RNA的高通量定量变得十分简单。您只需要2 µL样品和10分钟时间即可检测量多达96个样品。即使检测高浓度样品，也无需稀释。测量准确度在2%以内，精度在1%以内，符合USP和欧洲药典指南。符合SBS标准的96孔板能够方便的与实验室自动化和液体处理程序集成。使用Lunatic使浓度定量分析变得如此简单，只需加样、放入仪器并读取数据即可。
Stunner
在基于Lunatic的96孔微量高通量紫外/可见分光光度法的基础上，Stunner加入了动态光散射技术，形成了一套全新组合。这些技术的结合，能够在一次实验中就提供浓度、流体动力学大小、颗粒分散性、是否有聚集体等数据。全面的解析您的样品状态。
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