腺病毒载体的滴度及其空/实心率

面临的挑战

腺病毒 (Adenovirus,AdV) 载体用途广泛,是许多正在开发的基因疗法和疫苗的核心物质。当制造或使用腺病毒载体时,我们需要了解其衣壳滴度、空/实心率,以及物质是否会发生聚集,这非常重要。在使用超速离心法或色谱分析法之后,我们通常需要了解腺病毒载体样品或组分的滴度、空/实心率和纯度,以快速作出下一步操作。

在260nm的紫外/可见光的吸光度 (A260测量法) 通常被认为是测定腺病毒载体滴度的理想方法。然而,由于需要对腺病毒载体进行变性处理,整个测定过程通常需要30分钟。此外,A260测量法的测定结果还会受到各种因素的影响,如蛋白质、DNA污染或任何其他的吸光物质。虽然目前已存在一些技术含量比较高的测量方法,但这些方法要么就是检测速度太慢,要么需要进行大量的手动操作和大量样品,无法快速、简便地对腺病毒载体样品进行检测。

解决方案

仅需2 μL样品,Stunner就可以提供腺病毒载体的滴度、空/实心率和聚集状态的完整信息。Stunner可以通过结合紫外/可见光谱测出的信息与静态光散射动态光散射 (SLS & DLS) 得到的结果,测量滴度低至1E12 vg/mL的病毒样品,并能在1小时内检测96份样品的颗粒大小和聚集状态。Stunner用起来操作简单,在检测样品时无需任何染料、标签和标准曲线,同时,它还可以测量腺病毒载体的任何血清型以及腺病毒载体中的任何治疗性基因。

实验论证

Stunner的Adeno Quant应用程序可以快速检测腺病毒载体,同时不会让任何样品发生变性。Unmix算法可以分析在腺病毒载体样品对紫外/可见光谱的总吸收中,哪些吸收是由衣壳蛋白引起,哪些吸收是由DNA引起的,从而让我们可以了解到实际的蛋白质和DNA的含量。

同时,动态光散射也会对样品进行测量,显示大小处于微小颗粒或聚集物之间的腺病毒载体衣壳的粒径分布峰。在动态光散射 (DLS) 测量期间,静态光散射 (SLS) 的光强会被收集,从而得到腺病毒载体衣壳的散射光峰值,该衣壳峰值是评估腺病毒衣壳滴度的理想指标。

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UV_Vis Graph 2_small

Stunner通过结合紫外/可见光谱所测出的信息与动态光散射和静态光散射所测出的结果,为我们快速提供了有关清晰腺病毒载体的总滴度和完整衣壳的滴度的数据,这样的结合可以无忧样品受污染。只需2 μL样品,即可获得相关数据。

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Stunner Front cc_crop_downsize

Stunner

只需2 μL样品,Stunner就能通过紫外/可见光谱动态光散射 (DLS) 静态光散射 (SLS),获取病毒样品的滴度数据。Stunner不仅可以检测完整衣壳的滴度和空/实心率,还能收集样品的治疗性成分的含量和大小数据等信息。通过结合浓度、流体力学粒径、多分散性和聚集检测的数据,Stunner可以一下子就帮我们确定腺病毒载体、腺相关病毒 (AAV) 载体、纳米颗粒和蛋白质的品质,然后我们就可以得知这些物质是否能进一步使用了。

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